【第二代试管婴儿技术】即是单精子卵胞浆显微注射技术（ICSI），是将单个精子通过显微注射的方法注入卵母细胞浆内，从而使精子和卵母细胞被动结合受精，形成受精卵并进行胚胎移植，达到妊娠目的。

【ICSI适应症】

1、严重的少、弱、畸精子症。

2、不可逆的梗阻性无精子症。

3、生精功能障碍（排除遗传缺陷疾病所致）。

4、免疫性不育。

5、体外受精失败。

6、精子顶体异常。

7、需行植入前胚胎学检查者。

【治疗前准备】

在单精子卵胞浆显微注射技术助孕前，夫妇双方做以下准备：

（一）符合国家生育政策

提供双方身份证、结婚证，同时需签署符合国家计划生育政策的承诺书。

（二）男女双方进行相关检查

（三）签署相关知情同意书

【ICSI的操作过程】

（一）剥卵

剥卵是指依次应用透明质酸酶消化法和机械剥除法，将包围在卵母细胞外的颗粒细胞及放射冠去除，使卵母细胞“裸露“出来的过程。剥卵一般在取卵后2小时左右进行。

（二）安装显微操作针

开始操作前检查操作系统和工作环境，确认无误后将显微操作针精细调校至最佳工作角度和高度。

（三）精子制动

精子在制动剂内游动的速度大大减慢，易被注射针制动和捕获。操作时注射针稍微调高后，垂直放于仍活动精子的尾部中段或下段，慢慢下压，随即将细细的注射针快速拉过精子尾部，精子即被制动。精子制动后便于注射针捕获精子，此外制动后的精子尾部膜破裂，有利于激活卵子。

（四）卵子注射

用持卵针吸住卵子，调整好卵子的角度，使卵子极体位于12点钟位置。将提前吸入显微注射针的精子推到针尖的位置并控制，调整好角度后，从卵母细胞3点钟位置进针。回吸，确认卵母细胞破膜后，将精子推入卵母细胞。逐一注射每一个成熟卵子，放入培养箱单独培养。

（五）ICSI后卵母细胞培养和受精观察

ICSI后的卵母细胞经胚胎分裂期培养液充分洗涤后，移入分裂期培养液，随后培养皿置于37℃、5%或6%培养箱内行胚胎体外培养，次日观察并记录受精情况后继续行胚胎体外培养。ICSI后16-18小时，倒置显微镜下观察卵母细胞内是否存在双原核（2PN），若出现，说明卵子受精正常。